花粉管通道法介导的铁皮石斛转基因技术

• 作者: 付传明 何金祥 冼康华 苏江 黄宁珍 龚庆芳
• 来源期刊: 广西植物
• 学科: 生物学
• 关键词: 铁皮石斛 花粉管通道法 质粒 农杆菌 转基因
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 植物生理与遗传育种
• 页码范围: 1101-1110
• 页数: 10页
• 分类号: Q943.2|Q785
• 字数: 6453字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11931/guihaia.gxzw201608034

摘要

该研究以含有GFP和GUS基因的质粒和农杆菌为载体,采用花粉管通道法对铁皮石斛进行转基因技术研究.结果表明:(1)铁皮石斛种子萌发和原球茎生长对卡那霉素的最低致死浓度分别为90和150 mg·L-1.进一步研究证实,在筛选转化种子和原球茎时,可分别向培养基中添加100和150 mg·L-1的卡那霉素进行选择培养.(2)以携带GFP和GUS基因的质粒(pSuper1300和pBI121)和农杆菌为载体,用无菌去离子水重悬质粒pSuper1300和pBI121至浓度为100 ng·μL-1,用2%蔗糖+1/2MS+0.1%silwet-77+0.1%AS或5%蔗糖+0.1%sil-wet-77+0.1 mmol·L-1 AS重悬携带质粒pSuper1300和pBI121的农杆菌至菌液浓度为OD600=0.7~0.8;在授粉后0.5~2.5 h内使用柱头滴加法导入携带外源基因的质粒或农杆菌溶液,收集成熟的转化种子,经选择培养及PCR检测发现,几乎所有处理的转化材料均能检测出外源GFP和GUS基因片段.另外,与农杆菌相比,以质粒为载体进行转化,可获得更高的结实率.该研究结果为铁皮石斛的基因工程育种提供了参考.