褐藻胶裂解酶基因的克隆表达及重组酶酶学性质

• 作者: 叶秀云 徐凡 林娟 谢勇 韩伟
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 褐藻胶裂解酶 交替假单胞菌 克隆表达 重组酶 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能研究
• 页码范围: 1074-1080
• 页数: 7页
• 字数: 4771字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160518

摘要

[目的]克隆交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.) BYS-2的褐藻胶裂解酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源表达,对分离纯化的重组酶进行酶学性质研究.[方法]以交替假单胞菌BYS-2菌株基因组DNA为模板,克隆得到褐藻胶裂解酶基因alg738,构建重组基因工程菌BL21 (DE3)/pET22b-alg 738,诱导表达,表达产物通过Ni-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究.[结果]重组酶的最适反应pH为8.0,在pH 6.0-9.0范围内37℃保温lh仍能保持84％以上的相对酶活力,具有较好的pH稳定性;最适反应温度为45℃,热稳定性实验显示在37℃下保温60 min其残余酶活力仍达66.6％;在5 mmol/L浓度下,Na+、Mg2+、Mn2+对该酶具有明显的促进作用,Ni2+、C02+、Cu2+、Hg2+、Zn2+、EDTA、β-巯基乙醇、SDS具有明显的抑制作用.动力学参数Km、Vmax分别为1.11 g/L和0.011 g/(L.min),底物特异性分析表明该重组酶为偏好聚甘露糖醛酸钠(Poly M)裂解作用的双功能酶.[结论]重组褐藻胶裂解酶具有良好的酶学特性,为褐藻胶裂解酶的开发应用打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶秀云		13	77	6.0	8.0
2	林娟		11	78	6.0	8.0
3	韩伟		1	6	1.0	1.0
4	谢勇		1	6	1.0	1.0
5	徐凡		1	6	1.0	1.0