实时荧光定量PCR扩增特异性vapA基因检测杀鲑气单胞菌

• 作者: 刘帅 卢彤岩 曹永生 朱国建 李绍戊 杨晨 王荻
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 虹鳟 杀鲑气单胞菌 vapA基因 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 页码范围: 1928-1935
• 页数: 8页
• 分类号: S941.42
• 字数: 4769字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20161110608

摘要

为实现杀鲑气单胞菌早期快速准确定量检测,研究旨在建立杀鲑气单胞菌的SYBR Green I实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法.根据GenBank中杀鲑气单胞菌毒力阵列蛋白基因(vapA)保守序列设计并合成一对特异性引物,对其特异性、灵敏度、可重复性和应用性进行评价.结果显示,研究设计的引物具有良好的种间特异性,仅对杀鲑气单胞菌及其亚种有阳性扩增,与其他细菌不发生交叉反应.构建的Real-time PCR标准曲线质粒拷贝数与循环阈值呈良好的线性关系,扩增所得标准曲线分别为y=–4.8345x+42.535,相关系数R2为0.998,最低检测限为34拷贝/μL,较常规PCR的灵敏度高出约1000倍.应用建立的方法检测人工感染的虹鳟病样,15个被检样品呈阳性反应,与细菌常规鉴定方法结果一致.研究表明,所建立的基于实时荧光定量PCR技术的杀鲑气单胞菌检测方法快速、特异、灵敏,可用于临床诊断和疫病监测.