柔嫩艾美耳球虫烯醇化酶基因的克隆表达和抗原性分析

• 作者: 严若峰 宋小凯 张步彩 徐立新 朱善元 李祥瑞 袁橙 郭长明
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 烯醇化酶 克隆 表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 642-648
• 页数: 7页
• 分类号: S858.312.72+3
• 字数: 4612字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2017.03.023

摘要

从纯化的柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中提取总RNA,应用RT-PCR技术克隆获得了烯醇化酶基因(GenBank Accession No.GU169333).烯醇化酶基因开放阅读框长1338 bp,编码445个氨基酸.应用DNAstar软件对氨基酸序列的亲水区域和疏水区域的分布、抗原指数及T细胞基序进行分析,结果显示该蛋白质亲水性较强,抗原指数高,含较多T细胞表位.同时构建了烯醇化酶原核表达重组质粒pET-28a(+)-ENO.用IPTG对重组质粒pET-28a(+)-ENO进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白大小约为5.17×104,主要存在于裂解上清中.Western blotting结果显示该重组蛋白可被抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗体识别,表明该蛋白质具有较好的免疫原性.