龟鹿二仙胶诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化作用及对Wnt通路的影响

• 作者: 刘俊宁 张燕 李楠 林建华 牛素生
• 来源期刊: 中国中西医结合杂志
• 关键词: 龟鹿二仙胶 含药血清 骨髓基质干细胞 成骨分化 Wnt信号通路
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 72-78
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7661/CJIM.2017.01.0072

摘要

目的 观察龟鹿二仙胶合药血清对SD大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)成骨分化的作用及其对Wnt信号通路相关因子的影响.方法 100只3月龄雌性SD大鼠经腹腔入路切除双侧卵巢,按随机数字表法分为低剂量组、中剂量组、高剂量组和空白组,每组25只.按体表面积换算龟鹿二仙胶剂量并灌胃给药,连续7天后腹主动脉采血制备含药血清.1月龄SD大鼠全骨髓贴壁法分离BMMSCs,流式细胞法(flow cytometry,FCM)法检测F3代细胞CD45和CD90表达;不同浓度龟鹿二仙胶合药血清干预F3代BMMSCs 72 h后,FCM法检测细胞周期的影响并计算增殖指数,确定最佳干预浓度.F3代细胞分为FBS组、空白组、龟鹿二仙胶组和经典诱导组,诱导培养21天后,茜素红(alizarin red staining,ARS)染色法观察BMMSCs成骨分化,RT-PCR检测成骨分化相关基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨钙素(osteocalcin,OC)mRNA的表达;RT-PCR和Westernblot检测Wnt5a、β-连环蛋白(β-catenin)、淋巴样增强因子-1(lymphoid enhancer factor-1,Lef-1)mRNA和蛋白的表达.结果 F3代细胞CD45阳性表达率为1.46％±0.23％,CD90阳性表达率为96.97％±3.21％;浓度为10％的龟鹿二仙胶中剂量组合药血清能显著促进BMMSCs增殖;龟鹿二仙胶组和经典诱导组ARS染色可见橘红色钙结节.与空白组及FBS组比较,龟鹿二仙胶组和经典诱导组OC和ALP mRNA表达上调(P＜0.05),Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与空白组、FBS组和经典诱导组比较,龟鹿二仙胶组Lef-1 mRNA和蛋白表达均升高(P＜0.05);与FBS组和空白组比较,经典诱导组Lef-1蛋白表达上调(P＜0.05).结论 龟鹿二仙胶合药血清具有促进BMMSCs增殖,诱导BMMSCs向成骨细胞分化的作用,其机制可能与调控Wnt信号通路相关因子的表达有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李楠		79	1003	17.0	31.0
2	张燕		25	61	5.0	6.0
3	刘俊宁		16	34	3.0	5.0
4	牛素生		20	72	5.0	8.0
5	林建华		1	0	0.0	0.0