人白血病抑制因子在原核细胞中的表达与纯化

• 作者: 刘杨 张鹤铭 焦雪苗 甘龙站 田永强 蔡楚凡
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 白血病抑制因子 诱导 表达 简单纯化
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 7-14
• 页数: 8页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170902

摘要

研究证明人白血病抑制因子(hLIF)是一种对多种不同类型的细胞和组织具有重要功能的细胞因子,其独特的生物学特性使其被广泛应用.介绍了自制的具有生物活性的hLIF,将hLIF基因克隆到pET32a中,并利用硫氧还蛋白(TrX)作为融合配体,在大肠杆菌中成功表达可溶性融合蛋白Trx-hLIF.亲和层析纯化后利用SDS-PAGE和Western blot对纯化结果进行检验.利用肠激酶(EK酶)切割融合蛋白,释放hLIF,随后通过简单的阳离子交换得到纯度高达98.1％的hLIF4.75mg.小鼠M1髓系白血病细胞增殖分析测定纯化的rhLIF的功能与hLIF具有相似的生物活性,EC50为5ng/ml,对应的比活性为0.5×107 IU/mg.