K-ras原核表达载体的构建及生物学功能研究

• 作者: 刘阳 叶棋浓 尤文叶 崔越 晋帅 李玲 洪甜 王钰琦 陈思禹 韩笑 黄俊
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人K-ras基因 Ras/Raf/Mek/Erk 原核表达
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 324-327
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2167字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.016

摘要

目的:构建带Myc标签的K-ras原核表达载体,并初步鉴定其生物学活性.方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增人K-ras结构域的基因编码序列,插入载体pXJ-40得到重组质粒,经BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切鉴定后,West-erR印迹检测其在人293T细胞中的表达;利用GST pull down实验检测与Raf1-RBD的结合情况,验证其生物性活性.结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约570 bp的目的片段,插入载体pXJ-40后构建了Myc-K-ras重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;Myc-K-ras能在293T细胞中正确表达,并能与Raf1-RBD结合,具有生物学活性.结论:为进一步研究K-ras的生物学功能奠定了重要基础.