TEM-1型β内酰胺酶的原核表达纯化及活性验证

• 作者: 刘传杰 刘雪超 宁年智 徐建余 李涛 李静 王慧 黄洁
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: TEM-1 β内酰胺酶 表达 纯化 酶动力学
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 319-323
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3243字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.015

摘要

目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶.探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构建、酶的纯化及活性验证.方法:利用PCR技术,以大肠杆菌全基因组为模板钓取TEM-1基因,构建αET22b(+)-TEM-1表达质粒,经测序鉴定后,转入大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达、亲和纯化,并通过抗生素水解实验验证其酶活性.结果:构建了可溶性表达TEM-1的工程菌,通过亲和纯化最终获得纯度达90％以上的TEM-1型β内酰胺酶,该酶可水解氨苄西林.结论:获得了对氨苄西林具有水解活性的TEM-1型β内酰胺酶,并对其进行了酶动力学参数检测,验证其抗生素水解特性,有利于对临床抗生素的合理应用做出指导.