鲁氏耶尔森菌invF基因无痕缺失突变株的构建及生物学特性

• 作者: 刘韬 汪开毓 罗梦笛 胡伟 贺扬 闵洁
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鲁氏耶尔森菌 三型分泌系统 invF基因 无痕突变 生物学特性
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 页码范围: 1858-1866
• 页数: 9页
• 分类号: S941.42
• 字数: 6273字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20170310731

摘要

鲁氏耶尔森菌是一种具有广泛致病性的条件致病肠杆菌.三型分泌系统(T3SS)是该菌的重要毒力系统,其中invF基因是T3SS功能表达的重要调控因子.为探讨invF和T3SS对Y.ruckeri致病作用的影响,本研究构建了Y.ruckeri SC09株invF基因的无痕缺失株,并对其生物学特性进行研究.通过融合PCR方法,将invF基因的上、下游片段A、C融合,构建同源臂AC;将获得的同源臂AC连接入自杀质粒pLP12,构建pLP12-invF同源重组载体;pLP12-invF电转化进入供体菌株大肠杆菌β2163,并利用接合转移方法转入受体菌株Y.ruckeri SC09,利用抗生素正向筛选和vmt反向筛选分别对插入突变株和缺失突变株进行筛选,并利用PCR技术和序列测定对Y.ruckeri invF缺失株进行鉴定;对突变株和野生株进行菌体菌落形态观察、生化特性鉴定和生长曲线测定.结果显示,融合PCR、AC片段经氯霉素抗性正向筛选和vmt反向筛选,PCR鉴定和测序鉴定后,成功获得了Y.ruckeri SC09 invF基因的无痕缺失突变株,突变株和野生株菌体菌落形态和生化特性基本一致,突变株菌落较野生株小,各个时期突变株的生长浓度较野生株低.研究表明,采用自杀质粒pLP12和大肠杆菌β2163接合转移系统,利用抗生素正向筛选和vmt反向筛选技术,在对其基本生物学特性无显著影响的情况下,可简捷高效地获得invF基因的无痕缺失突变株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪开毓	四川农业大学动物医学院	270	2400	27.0	35.0
5	刘韬	四川农业大学动物医学院	21	22	2.0	4.0
6	贺扬	四川农业大学动物医学院	8	20	2.0	4.0
7	闵洁	四川农业大学动物医学院	1	2	1.0	1.0
8	胡伟	四川农业大学动物医学院	2	2	1.0	1.0
9	罗梦笛	四川农业大学动物医学院	1	2	1.0	1.0