同时监测8种牛常见病原体的GeXP高通量快速检测技术

• 作者: 刘加波 庞耀珊 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄莉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛传染病 GeXP 高通量检测
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1920-1931
• 页数: 12页
• 分类号: S858.235
• 字数: 7237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.10.015

摘要

本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体(口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒)的GeXP高通量快速检测方法.将多重PCR技术和毛细管电泳技术有效地结合,根据上述8种病原体的基因保守序列,设计并合成了8对特异性引物,在每对特异性引物的5'端加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物.优化反应体系和反应条件,用单一病毒和混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性,用克隆质粒稀释液来测试GeXP方法的灵敏度,检测305份临床样品,进一步验证该方法的可靠性.结果:优化后的GeXP检测体系,可扩增出各病原体对应的特异片段,能在100拷贝·μL-1水平同时并特异地检测出8种牛病病原体核酸.305份临床样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致,阳性样品测序结果表明无非特异性扩增的假阳性.结果显示,所建立的GeXP方法具有高通量、特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有较高的临床应用价值.