α-酮戊二酸半醛脱氢酶的定点突变及酶学性质变化

• 作者: 张博 熊涛 牛坤 秦海彬
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: α-酮戊二酸半醛脱氢酶 定点突变 表达纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 180-185
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0188

摘要

3-HP是一种性质优良的化学中间体,以甘油为底物生产3-HP的研究备受青睐,而限制3-HP产量的主要原因是AldH活力过低.对源于Azospirillam brasilense的 α-酮戊二酸半醛脱氢酶(KGSADH)基因同源建模和结构分析,采用定点突变方法得到高活力KGSADH,将突变酶表达纯化,探讨酶学性质的变化.结果表明,TU-KGSADH(E120D/P219A)酶活力达6.03 U/mg,比原始酶比酶活提高了322%,最适温度由35℃降低为30℃,且热稳定性降低,最适pH为8.0,在pH 6.0-8.0条件下酶活力有所提高.Zn2+对KGSADH的酶活有较强的抑制作用,而Co2+、Fe3+、Fe2+对KGSADH的酶活有较大的激活作用.在酶的动力学方面,TU-KGSADH对乙醛的Km由7.58降为6.28 mmol/L,Vmax由10.6提高为12.3 U/mg.对酶学性质改变的因素分析发现,120位突变与最适pH下降和pH稳定性向酸性偏移有关,219位突变可能是最适温度和热稳定性降低的原因,为醛脱氢酶进一步定向改造提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛坤	浙江工业大学生物工程学院浙江省生物有机合成技术研究重点实验室	14	40	4.0	5.0
2	秦海彬	浙江工业大学生物工程学院浙江省生物有机合成技术研究重点实验室	4	7	2.0	2.0
3	熊涛	浙江工业大学生物工程学院浙江省生物有机合成技术研究重点实验室	2	1	1.0	1.0
4	张博	浙江工业大学生物工程学院浙江省生物有机合成技术研究重点实验室	8	39	4.0	6.0