银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术的建立

• 作者: 周剑 周莉 张晓娟 李志 李熙银 桂建芳 汪洋
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 银鲫 卵母细胞成熟 体外诱导 生发泡 显微注射
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 页码范围: 984-991
• 页数: 8页
• 分类号: Q-366
• 字数: 5642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2017.123

摘要

研究以银鲫为材料,根据银鲫(Carassius auratus gibelio)卵母细胞生发泡(Germinal vesicle,GV)边移程度及剥离GV中减数分裂前期染色体的凝集状态,将银鲫Ⅳ时相的卵母细胞分为GV0、GV1、GV2和GV3四个时期;并进一步比较了分别处于这4个时期银鲫卵母细胞体外诱导培养的成熟率、卵裂率和孵化率.结果表明,GV1期之后的卵母细胞均可有效进行体外诱导成熟,可正常受精发育,由于GV1期卵母细胞有较长时间用于显微操作,因此GV1期卵母细胞被选为进行体外诱导的最早时期的卵母细胞.以GV1期卵母细胞为研究材料,摸索了银鲫卵母细胞体外诱导成熟的适宜条件:取GV1期的Ⅳ时相卵母细胞,放置于pH 8.5、加有1μg/mL孕酮激素(17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,DHP)的格氏平衡盐溶液(Gey's balanced salt solution,GBSS)中,在23℃培养箱中体外诱导12h后,将滤泡膜剥离后再进行人工体外授精,其所获胚胎的孵化率可达55.5％.此外,将体外转录合成的带GFP标签的h2af1o mRNA注射到GV1期卵母细胞,发现经显微操作和体外诱导后不仅可以通过GFP绿色荧光信号活体观察GVBD、受精、卵裂和早期胚胎发育的全过程,而且诱导成熟的卵子仍可正常受精和胚胎发育.研究建立的银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术为银鲫和其他鱼类卵母细胞发育过程研究及其相关基因和细胞显微操作提供了技术平台.