腺病毒介导shRNA干扰绵羊MSTN基因效果及对生肌调节因子和干扰素反应基因表达的影响

• 作者: 刘月琴 孙洪新 张英杰 王红娜 王苏瑶 谷振慧
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 MSTN 成肌细胞 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 1833-1842
• 页数: 10页
• 分类号: S826.2
• 字数: 5565字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.10.006

摘要

旨在进一步揭示MSTN在绵羊成肌细胞中的调控机制,制备可有效失活MSTN基因的工具,为通过RNA干扰技术提高绵羊产肉量提供方法和理论依据.本研究以绵羊成肌细胞为试验材料,构建特异靶向绵羊MSTN基因的shRNA干扰质粒载体,将干扰效果好的质粒进一步包装为重组腺病毒,转染细胞后采用qRT-PCR和Western blot检测MSTN基因以及生肌调节因子和干扰素反应基因的表达.结果表明,质粒ShR218和ShR511干扰MSTN基因效率分别达到35％和48％,双元干扰质粒ShR3+4干扰效率最高达到85％.成功包装shRNA重组腺病毒载体Sh511和Sh3+4,病毒滴度达到1×108 pfu·mL-1,对成肌细胞的感染效率达到90％以上.Sh511和Sh3+4对MSTN基因mRNA的表达抑制分别达到53％和76％,对蛋白表达抑制分别达到55％和64％.MSTN基因沉默后,伴随着My f5、MyoD、MyoG、My f6基因mRNA水平的极显著性下调(P＜0.01),但只引起MyoG蛋白水平极显著升高(P＜0.01),未引起Myf5、MyoD、Myf6蛋白水平的显著变化;腺病毒感染成肌细胞未引起OAS1基因mRNA水平的显著变化,但引起IFNGR1基因mRNA水平的极显著升高(P＜0.01),对二者蛋白水平均无显著影响.本研究成功构建靶向MSTN基因的shRNA腺病毒载体,能有效抑制成肌细胞MSTN的mRNA和蛋白表达,并影响生肌调节因子My f5、MyoD、MyoG、My f6基因和干扰素受体基因IFNGR1表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张英杰	河北农业大学动物科技学院	212	788	13.0	19.0
2	孙洪新		74	411	10.0	17.0
3	刘月琴	河北农业大学动物科技学院	171	654	12.0	18.0
4	王红娜	河北农业大学动物科技学院	18	37	4.0	5.0
5	谷振慧	河北农业大学动物科技学院	5	22	2.0	4.0
6	王苏瑶	河北农业大学动物科技学院	4	11	2.0	3.0