一种高效稳定的微生物总RNA提取方法

• 作者: 刘慧 吴思琪 宋静颐 张策 张红星 秦倩 谢远红 金君华
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 微生物 RNA提取 玻璃珠-酚仿
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·生理生化
• 页码范围: 517-523
• 页数: 7页
• 分类号: Q522
• 字数: 6476字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2017.03.006

摘要

本研究通过对玻璃珠-酚仿RNA提取方法进行改进优化,实现对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌这3类微生物RNA高效稳定的提取.结果表明,玻璃珠-酚仿提取法能有效提取的RNA最低菌体细胞量为1×107个,远低于试验所选商业化试剂盒所需细胞量.以1×107个细胞量为例,利用Beadbeater仪破碎30 s,使用直径100μm的玻璃珠破碎提取得到的细菌RNA浓度显著高于使用直径500μm的玻璃珠提取的.使用2种直径的玻璃珠所得酵母菌RNA浓度无显著性差异.在直径100μm的条件下,破碎30 s即可保证RNA的高效提取,对于长双歧杆菌、大肠杆菌和酵母菌,破碎时间长达150 s也不会引起RNA降解.本法所提RNA的A260/A280为1.96~2.10,A260/A230为2.03~2.44,浓度和纯度均优于试验所选商业化试剂盒所提的RNA.