双峰驼天然单域抗体库的构建及鉴定

• 作者: 包福祥 杜雅楠 温靖 芦婷 赵鑫鑫 邬春艳 阿米娜
• 来源期刊: 畜牧与饲料科学
• 学科: 农学
• 关键词: 双峰驼 天然抗体库 单域抗体 噬菌体展示技术
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础科学
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S858.242.4
• 字数: 5438字
• 语种: 中文

摘要

重链抗体的可变区VHH是目前天然存在的具有完整功能的最小抗体分子片段,该抗体在基础研究、药物开发等领域应用前景极为广阔.为了构建双峰驼天然单域抗体库并对其进行初步鉴定,从5峰未经免疫的健康骆驼全血中分离淋巴细胞,提取其总RNA,之后反转录为cDNA,利用PCR技术扩增全套编码重链抗体可变区的基因序列,将经过回收并酶切纯化的VHH序列克隆到噬菌体载体上,电转化大肠杆菌TG1感受态细胞,共转化343次.结果表明,构建的双峰驼天然单域抗体库库容为4.4×107,转化阳性率为75%,多样性良好,体现为CDR3区碱基序列及长度存在显著差异.成功地构建了双峰驼天然单域抗体库,为今后从中筛选出具有应用价值的特异性单域抗体奠定了基础.