A-Raf-S214C突变体的构建、表达及其对MAPK信号 通路的影响

• 作者: 刘莹 安输 徐天瑞 李安毅 杨洋 郝倩 郭晓汐
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: A-Raf激酶 MAPK信号通路 信号传导
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 185-190
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0445

摘要

为了观察A-Raf的突变体A-Raf-S214C对MAPK(mitogen-activated protein kinase,丝裂原活化蛋白激酶)信号通路的影响,并探讨其诱发肺癌和朗格汉斯增生症的可能分子机制.通过定点突变构建pcDNA5-FRT-TO-A-Raf-S214C突变质粒,并利用该质粒构建稳定表达A-Raf-S214C突变体的HEK293细胞系,之后通过检测下游ERK磷酸化程度,确定该突变体对MAPK信号通路的影响.结果显示,通过实验成功构建了稳定表达A-Raf-S214C突变体的细胞系,在不同浓度的多西环素诱导下,其表达量有所不同.与野生型相比,A-Raf-S214C突变体可明显增强MAPK信号通路中下游信号分子ERK的磷酸化.结果表明A-Raf-S214C突变体是A-Raf激酶的激活突变体,可以导致MAPK信号通路下游信号分子ERK磷酸化明显增强.