猪GM-CSF稳定表达细胞系的建立

• 作者: 何玉林 冯园 巨向红 巩栋梁 李俊敏 雍艳红 韦璇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 GM-CSF 真核表达 稳定细胞系
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 963-970
• 页数: 8页
• 分类号: S826.2
• 字数: 5376字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.05.022

摘要

旨在建立能稳定表达猪GM-CSF的细胞系.本研究利用NCBI已公布猪GM-CSF基因序列设计引物,采用RT-PCR法扩增出猪GM-CSF开放阅读框(ORF).发现其长435 bp,编码144个核苷酸的蛋白.该蛋白分子质量为16.3 ku,等电点为7.15.与绵羊、马、猫、牛、狗和人的同源性分别为77.1％、73.6％、72.2％、71.5％、71.3％和70.8％.通过EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后,将GM-CSF基因插入pIRES2-EGFP载体中,构建出pIRES2-EGFP-pGM-CSF重组质粒.该重组质粒转染猪肠上皮细胞(IPEC-J2)后,G418筛选阳性细胞.在转染后24h,荧光定量PCR可见GM-CSF mRNA表达量较对照组及空载体组细胞显著升高(P＜0.01),荧光显微镜下亦可见大量绿色荧光表达.该细胞系在含有G418的培养液中连续传代30次,仍可见GM-CSF基因和蛋白水平的高表达.本研究成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-pGM-CSF和能稳定表达猪GM-CSF的细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雍艳红	广东海洋大学动物医学系	24	105	7.0	9.0
2	巨向红	广东海洋大学动物医学系	33	119	6.0	9.0
3	何玉林		19	46	4.0	6.0
4	李俊敏		1	0	0.0	0.0
8	巩栋梁	广东海洋大学农学院动物科学系	3	2	1.0	1.0
9	冯园		1	0	0.0	0.0
10	韦璇		2	5	1.0	2.0