磁珠筛选抗Cry2 Aa人源化单链抗体及检测方法的建立

• 作者: 刘媛 刘贤金 武爱华 王耘 胡晓丹
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 地球科学
• 关键词: Cry2Aa毒素 单链抗体 磁珠 间接竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏·质量安全
• 页码范围: 945-950
• 页数: 6页
• 分类号: X836
• 字数: 3920字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2017.04.034

摘要

为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(scFv).通过4轮"扩增-吸附-洗脱",从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定.选取相对结合活性最好的阳性克隆建立间接竞争ELISA,确定其检测范围.筛选后第4轮相对产出率较第1轮提高了4.07×106倍;单克隆ELISA鉴定出8个含有完整外源基因片段的阳性克隆,测序后获得3个不同序列的阳性克隆.D5克隆的噬菌体上清对Cry2Aa的检测灵敏度(IC10)为6.632 ng/ml,线性范围为0.016～2.881μg/ml.该克隆对Cry2Aa具有良好的特异性和板内板间重现性.