高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测

• 作者: 于璐 包海洋 吴长新 曹旭东 杨彩虹 杨敏 陈创夫
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 结核分枝杆菌 高分辨率熔解曲线(HRM) DNA测序 耐药性 异烟肼
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 403-412
• 页数: 10页
• 分类号: S855.2
• 字数: 6696字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2017.05.004

摘要

目的 评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟胼耐药性的应用价值.方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析.2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点.3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率.结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株.2)测序分析结果显示:①KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变.②inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位.3)①对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55％;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30％;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10％;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5％.通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95％、特异性为100％.②用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7％、特异性为80％.③以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株.以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95％、特异性为82.76％.结论 高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈创夫	石河子大学动物科技学院	192	732	14.0	17.0
2	曹旭东	石河子大学医学院	25	84	6.0	8.0
3	杨敏	石河子大学生命科学学院	13	39	4.0	6.0
4	吴长新	石河子大学医学院	5	21	3.0	4.0
5	包海洋	石河子大学动物科技学院	3	14	2.0	3.0
6	杨彩虹	石河子大学动物科技学院	2	17	2.0	2.0
7	于璐	石河子大学医学院	2	17	2.0	2.0