一种大量提取红豆杉中总RNA的方法研究

• 作者: 周应军 曾光尧 曾奇峰 邓旭 陈小凤
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 红豆杉 总RNA提取 Trizol法 CATB法 凝胶柱层析法
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 60-66
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0319

摘要

旨在确定高质量红豆杉中总RNA的提取和纯化工艺条件.以湖南长沙红豆杉叶为材料,以Trizol和CATB两种植物RNA通用提取方法为基础,以RNA的浓度、OD260/OD瑚及OD260/OD230的比值为标准,考察提取方法、提取试剂、提取时间等因素对RNA提取率的影响,优化了红豆杉叶中总RNA的提取方法;通过对比PVP法、p-巯基乙醇法、高盐沉淀法、低浓度乙醇沉淀法、凝胶柱层析法五种不同纯化方法来探讨对红豆杉RNA的影响.考虑到成本的问题,选择使用Trizol法提取红豆杉总RNA,确定了较优的提取条件:红豆杉叶与Trizol提取液的作用体积确定为3:40;裂解时间确定为5 min;氯仿与水液的作用体积确定为1:5.实验表明凝胶柱层析法能显著的提高红豆杉总RNA的纯度并能得到富含miRNA的小分子RNA.最终可得到浓度约为1 000 μg/mL,OD260/OD280在2.00-2.20之间及OD26/OD230大于1.7的高质量RNA样品.与现有的提取方法相比,本方法提取的红豆杉总RNA具有很高的质量和纯度,且大大降低了提取成本,并首次实现了植物总RNA的大量提取.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾光尧	中南大学湘雅药学院	47	444	13.0	19.0
2	周应军	中南大学湘雅药学院	66	708	16.0	23.0
3	邓旭	中南大学湘雅药学院	5	9	2.0	3.0
4	曾奇峰	中南大学湘雅药学院	2	3	1.0	1.0
5	陈小凤	中南大学湘雅药学院	1	3	1.0	1.0