柑橘碎叶病毒(CTLV)单克隆抗体的制备及其检测应用

• 作者: 吴建祥 周常勇 周雪平 宋西娇 段硕 洪健
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柑橘碎叶病毒(CTLV) 单克隆抗体 斑点酶联免疫吸附实验(dot-ELISA)
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 165-172
• 分类号: S431
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.01.020

摘要

柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)是严重危害世界柑橘(Citrus reticulata)产业的重要病毒,也是柑橘脱毒苗生产上的重要检疫对象.为了建立以抗CTLV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)为核心的检测CTLV的血清学方法.本研究以原核表达的CTLV外壳蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),经细胞融合、筛选和克隆获得3株(6C5,14E11和15F8)分泌抗CTLV单克隆抗体的杂交瘤细胞.分别制备3株杂交瘤细胞的单抗腹水,经鉴定单抗腹水的抗体类型及亚类均为IgGl、κ链,单抗腹水的间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)效价达到10-6以上.三抗体夹心酶联免疫吸附实验(triple antibody sandwich ELISA,TAS-ELISA)和Western blot分析单抗特异性表明,3株单抗均与感染CTLV柑橘病叶有特异性免疫反应,而不与柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)及健康柑橘树叶反应.利用制备的单抗为核心建立能特异性地检测柑橘病叶中CTLV的斑点酶联免疫吸附实验(dot-ELISA).灵敏度分析表明,以3株单抗为核心建立的dot-ELISA方法检测病叶组织的灵敏度达1∶640 (W/V,g/mL).田间样品检测结果表明,建立的dot-ELISA方法能准确、可靠和灵敏地用于柑橘树中CTLV病毒的检测.本研究为我国柑橘树中CTLV的诊断、无毒苗的生产及科学防控提供了技术支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周常勇	西南大学中国农业科学院柑橘研究所	51	373	12.0	16.0
2	段硕	西南大学中国农业科学院柑橘研究所	2	12	2.0	2.0