猪Utx慢病毒过表达/干扰载体的构建和病毒包装

• 作者: 张鹏飞 曾文先 朱晋生 李爽 闫海龙 陈晓旭
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 组蛋白去甲基化 Utx shRNA 慢病毒 过表达载体 干扰载体
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: S811.5
• 字数: 4879字
• 语种: 中文

摘要

UTX(ubiquitously transcribed TPR gene on the X chromosome)作为H3K27me2/3的去甲基酶,能够调控动物发育过程,并有着重要的生物学作用.根据猪Utx预测序列,扩增Utx的CDS区全长序列.利用Utx的CDS区序列信息,构建pCD513B-CMV-Utx过表达载体,设计并合成干扰shRNA和阴性对照寡核苷酸片段.其中干扰shRNA及阴性对照通过退火形成双链DNA,并插入pCD513B-U6慢病毒干扰载体.采用双酶切的方法和DNA 测序鉴定重组载体.通过干扰和过表达载体质粒共转293T细胞, 利用qRT-PCR筛选出最有效的干扰序列.重组质粒与其他3种慢病毒辅助包装质粒(pRsv-Rev、pGag-Pol、pVSV-G)共转染293T 细胞包装慢病毒.结果表明,本试验成功扩增Utx基因的全长序列,且成功构建了Utx的过表达和干扰载体.qRT-PCR筛选出pCD513B-U6-Utx-shRNA-3干扰效率最显著,干扰效率为70%.本试验成功包装出慢病毒Lenti-Utx-shRNA、Lenti-NC和Lenti-Utx,测定的病毒滴度分别为6.1×107 TU/mL 、4.8×107 TU/mL和3.9×105 TU/mL.此试验为进一步在猪源细胞中进行Utx基因的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李爽	西北农林科技大学动物科技学院	14	165	5.0	12.0
2	陈晓旭	西北农林科技大学动物科技学院	4	16	2.0	4.0
3	朱晋生	西北农林科技大学动物科技学院	2	12	1.0	2.0
4	闫海龙	西北农林科技大学动物科技学院	18	59	5.0	7.0
6	曾文先	西北农林科技大学动物科技学院	17	31	4.0	5.0
7	张鹏飞	西北农林科技大学动物科技学院	10	12	3.0	3.0