荧光共振能量转移法对细胞cAMP含量的实时检测

• 作者: 吴莉 张梅 汪庆童 汪龙生 王瑞 胡珊珊 韩陈陈 马旸 魏伟
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光共振能量转移 cAMP G蛋白偶联受体 荧光探针 活细胞研究
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1726-1730
• 页数: 5页
• 分类号: R34|R312|R965.2|R-331
• 字数: 4035字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2017.11.032

摘要

大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)转染pcDNA3-ICUE3质粒,用荧光共振能量转移(FRET)法观察前列腺素(PGE2)刺激下大鼠FLS环磷酸腺苷(cAMP)水平的实时变化,与放免法检测进行比较.FRET检测到FLS在PGE2刺激后1 min,cAMP升高14.93％,且不同批次实验差异较小;放免法检测到cAMP升高7.79％;FRET可检测到PGE2受体拮抗剂对cAMP产生的抑制,可观察到1 nmol/L PGE2促进cAMP产生,放免法检测PGE2产生效应最低浓度为0.1μmol/L.提示FRET法检测灵敏、重复性高,为G蛋白偶联受体信号通路研究的可靠技术手段.