小麦蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及重组酶性质

• 作者: 侯轶 刘光 张婷婷 李琳 王敬敬 胡松青
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 小麦蛋白质二硫键异构酶 克隆 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 7-14
• 页数: 8页
• 分类号: Q816
• 字数: 5794字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201702002

摘要

目的:克隆小麦蛋白质二硫键异构酶(wheat protein disulfide isomerase,wPDI)基因,实现其在大肠杆菌中的表达并探究其酶学性质.方法:以小麦种子总RNA为模板,逆转录并扩增得到wpdi,并以pET-30b为表达载体、大肠杆菌BL21 (DE3)为宿主菌进行原核表达,表达产物经金属螯合层析纯化后进行了酶学性质研究.结果:克隆的基因全长1 548 bp,与“Wyuna”品种小麦wpdi基因相似性达99％.构建了pET-30b-wpdi表达载体,获得wPDI的最佳表达条件为:诱导温度22℃,诱导时间6h,诱导剂浓度0.5 mmol/L.该酶含4个硫氧还蛋白结构域,分子质量约为66.2 kD,具有二硫键的还原酶和异构酶活性以及分子伴侣活性.结论:对重组wPDI的表达和酶学性质研究,为wPDI在面制品加工及其他方面的应用提供参考依据.