超声靶向微泡联合肽核酸结合核定位信号肽增强基因转染的实验研究

• 作者: 冯闯丽 周青 姜楠 曹省 胡波 郭瑞强 陈茜
• 来源期刊: 中华超声影像学杂志
• 关键词: 超声处理 微气泡 肽核酸 核定位信号 转染
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 442-447
• 页数: 6页
• 字数: 4777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1004-4477.2017.05.015

摘要

目的 应用超声靶向微泡破坏(UTMD)介导连接有核定位信号(NLS)的质粒DNA转染293T细胞,增加基因入胞及入核量,从而提高细胞对外源基因的转染效率.方法 合成连接有细胞特异性抗体的靶向微泡,特异性识别293T细胞膜表面SV40T抗原,强化UTMD空化作用使细胞膜通透性增加,从而提高质粒入胞率;通过肽核酸(PNA)将NLS与增强型绿色荧光蛋白质粒(EGFP-N3)基因交联,构建一种基因传递系统介导细胞核对外源基因的摄取.转染后比较以下几组间转染效率:空白对照组(A组)、普通微泡+质粒组(B组)、靶向微泡+质粒组(C组)、普通微泡+ NLS-PNA-DNA组(D组),靶向微泡+NLS-PNA-DNA组(E组).倒置荧光显微镜观察荧光分布情况;CCK-8检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞转染率;RT-PCR以及Western blot检测目的基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 UTMD联合靶向微泡可显著提高胞质对外源性DNA的摄入,且细胞存活率均＞80％;倒置荧光显微镜示细胞内绿色荧光表达量依次递增;流式细胞仪检测五组基因转染效率分别为0、(9.30±0.46)％、(26.46±2.01)％、(29.54±0.62)％、(45.72±1.86)％,差异均有统计学意义(P均＜0.05);E组EGFP的mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于C、D组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 UTMD介导靶向微泡和连接有核定位信号的质粒DNA可明显增加细胞对质粒DNA的摄取表达,显著提高外源基因的转染效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭瑞强	武汉大学人民医院超声影像科	308	1902	18.0	28.0
2	周青	武汉大学人民医院超声影像科	236	1256	15.0	21.0
3	陈茜	武汉大学人民医院超声影像科	29	161	7.0	12.0
4	胡波	武汉大学人民医院超声影像科	116	600	11.0	17.0
5	曹省	武汉大学人民医院超声影像科	50	183	7.0	10.0
6	冯闯丽	武汉大学人民医院超声影像科	10	40	4.0	6.0
7	姜楠	武汉大学人民医院超声影像科	14	53	3.0	7.0