牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因的克隆及其在乳腺上皮细胞中的表达

• 作者: 余四九 崔燕 张译夫 李月琴 樊江峰 潘阳阳 田奎丽 赵天
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 葡萄糖转运蛋白1(GLUT1) GLUT3 GLUT8 乳腺上皮细胞
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 21-31
• 分类号: S857.2+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.01.003

摘要

乳腺中葡萄糖摄取主要依赖葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,GLUT),不同GLUT对葡萄糖摄取所起作用不同.为研究GLUT1、GLUT3和GLUT8参与牦牛(Bos grunniens)泌乳机能调节的分子机制,本研究采用胰酶消化法离体培养牦牛乳腺上皮细胞,通过免疫细胞化学方法检测角蛋白18、β-酪蛋白和波形蛋白;从纯化的细胞中分别克隆牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因,并分析其相关生物学特性;采用qRT-PCR和Western blot分别从基因和蛋白水平分析三者在乳腺上皮细胞表达差异性,间接免疫荧光检测其在乳腺上皮细胞中的分布.结果显示,角蛋白18和β-酪蛋白在分离得到的细胞中表达,波形蛋白不表达,所分离的细胞为乳腺上皮细胞.成功克隆出包含完整编码区的牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因序列(GenBank登录号分别为:KU902419,KX094556和KX268646),其编码区核苷酸长度分别为1479、1 485和1 437 bp,分别编码492、494和478个氨基酸;三者在进化过程中均有较高的保守性,编码的蛋白具有相似理化性质,均具有12个跨膜螺旋区的疏水性膜蛋白.在乳腺上皮细胞中,GLUT1的表达量最高,GLUT8的表达量次之,GLUT3的表达量最低,且三者之间的表达差异极显著(P＜0.01).牦牛乳腺上皮细胞胞质和胞核均有GLUT1、GLUT3和GLUT8蛋白表达,且主要分布在细胞核.研究结果为了解牦牛GLUT生理学功能提供了重要信息,为进一步研究其调控牦牛泌乳机能的生物学作用提供了新的理论依据.