玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚中细胞凋亡的影响

• 作者: 吴彩凤 张德福 张树山 戴建军 钮莹芳 陈亚宁
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 孤雌激活胚胎 玻璃化冷冻 线粒体 凋亡 凋亡途径
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 243-251
• 页数: 9页
• 分类号: S828.2
• 字数: 5608字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.02.007

摘要

旨在研究玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚中细胞凋亡的影响.通过体外培养观察冷冻-解冻后囊胚腔的恢复情况,JC-1检测线粒体膜电位变化、TUNEL法检测胚胎中细胞凋亡水平,免疫荧光分析多种Caspase活性,以及qRT-PCR检测凋亡相关功能基因的mRNA表达水平.结果表明,冷冻-解冻后囊胚的囊胚腔恢复率(31.03％)和囊胚细胞数(31.81)与新鲜囊胚(100.00％和38.17)相比均显著下降(P＜0.05).冷冻后囊胚的线粒体膜电位(0.46)与新鲜囊胚(1.02)相比显著下降(P＜0.05).TUNEL凋亡染色后,冷冻囊胚中凋亡阳性细胞的比例(10.13％)显著高于新鲜囊胚(5.92％,P＜0.05).Caspase原位荧光染色结果表明,Pan-caspase、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3冷冻-解冻囊胚的荧光强度值(20.65、20.60、17.58和19.88)均显著高于新鲜囊胚(7.41、6.46、5.47和6.32,P＜0.05).经qRT-PCR检测,冷冻组中Caspase-8、Caspase-9、TNF-α基因的mRNA表达水平均显著高于新鲜组(P＜0.05),BCL2、SOD-1的mRNA表达水平则显著低于新鲜组(P＜0.05).综上表明,玻璃化冷冻可造成猪孤雌激活囊胚线粒体功能下降,并在死亡受体和线粒体途径上共同介导囊胚内细胞凋亡的发生.