摘要:
目的 探讨康柏西普联合血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)受体抑制剂对CoC12诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞增殖、迁移以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA及蛋白表达的影响.方法 体外培养ARPE-19细胞,取对数生长良好的细胞,用不同浓度CoCl2诱导培养,细胞增殖与CCK-8法检测ARPE-19细胞增殖活性,筛选最佳CoCl2浓度用于构建缺氧模型;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、不同浓度康柏西普组,CCK-8法检测不同浓度康柏西普对缺氧损伤后ARPE-19细胞增殖的影响,筛选最佳康柏西普浓度;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、不同浓度PDGF受体抑制剂组,CCK-8法检测不同浓度PDGF受体抑制剂对缺氧损伤后ARPE-19细胞增殖的影响,筛选最佳PDGF受体抑制剂浓度;将培养的ARPE-19细胞分为正常组、缺氧组、20 mg·L-1康柏西普组、20 μmol·L-1PDGF受体抑制剂组、康柏西普联合PDGF受体抑制剂组(最佳药物浓度组合);CCK-8法检测缺氧损伤后各组ARPE-19细胞增殖活性,Transwell小室检测细胞的迁移情况,ELISA法检测细胞上清液中VEGF蛋白浓度,应用实时荧光定量PCR法检测细胞VEGF mRNA的表达水平.结果 CCK-8筛选结果显示,100 μmol·L-1 CoCl2处理组ARPE-19细胞的吸光度值最大(1.063±0.031),设立为缺氧细胞模型浓度.CCK-8筛选结果显示,20 mg·L-1康柏西普组细胞增殖率为(94.58±3.80)%、20μmol· L-1PDGF受体抑制剂组细胞增殖率为(96.72±5.44)%,效果均较其他相应组好,选取该浓度进行后续实验.析因分析发现缺氧损伤后各药物处理组(康柏西普、PDGF受体抑制剂、康柏西普联合PDGF受体抑制剂)与缺氧组比较,细胞增殖活性下降,细胞迁移数降低,VEGF蛋白浓度亦下降,其中康柏西普联合PDGF受体抑制剂组下降最明显,康柏西普组及两药联合处理组ARPE-19细胞VEGF mRNA表达较缺氧组降低.结论 缺氧损伤后可诱导ARPE-19细胞增殖、迁移,VEGF蛋白相对表达量增加,VEGF mRNA表达上调;康柏西普联合PDGF受体抑制剂对缺氧损伤后ARPE-19细胞的增殖、迁移及VEGF蛋白、VEGFmRNA的表达有抑制作用,作用效果优于单独应用康柏西普.