基于核酶开关的哺乳细胞内硫胺素焦磷酸荧光生物传感器的建立

• 作者: 吴正岩 孙艳 张媛媛 王金娥 程慧 裴仁军
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 硫胺素焦磷酸核酶开关 增强绿色荧光蛋白 基因表达调控 荧光生物传感器 哺乳细胞
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 157-162
• 页数: 6页
• 字数: 4294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.160688

摘要

硫胺素焦磷酸(Thiamine pyrophosphate,TPP)是维生素B1在细胞内的主要活性形式,也是糖、脂肪酸和氨基酸氧化代谢中重要的辅助因子.在细胞内,利用TPP适配体与天然核酶组装成的人工核酶开关调节靶基因表达,目前仅局限于原核、真菌或植物细胞.本实验将原核生物中筛选的“Switch-on”与“Switch-off"的两种类型的TPP核酶开关,运用重叠延伸PCR的方法构建于增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的3'非翻译区(UTR),转染人胚肾上皮细胞(HEK293),通过荧光显微镜和流式细胞仪分析,观察了不同浓度TPP对EGFP表达能力的调控.结果表明,构建的两种“Switch-on”和一种“Switch-off”核酶开关均表现出明显的TPP浓度依赖性,且具有良好的特异性,在150 μmol/L TPP时分别将EGFP的荧光强度提高3.1倍、1.9倍和降低2.3倍.这种构建通过TPP与核酶开关中其适配体的特异性作用直接将TPP浓度的变化转化为报告基因表达的改变,利于通过荧光检测方法实现对哺乳活细胞内代谢物或因子的无标记、无损伤、可视、高效的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张媛媛	安徽医科大学生命科学学院	48	219	8.0	11.0
4	程慧	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	4	78	3.0	4.0
5	孙艳	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	47	652	12.0	25.0
6	吴正岩	中国科学院合肥物质研究院	6	13	1.0	3.0
7	裴仁军	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	10	100	5.0	10.0
8	王金娥	中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所	5	10	2.0	3.0