长柱金丝桃ISSR-P CR反应体系的建立与优化

• 作者: 王丽俊 王霞
• 来源期刊: 东北林业大学学报
• 关键词: 长柱金丝桃 ISSR反应体系 正交试验 引物筛选
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: S567.239
• 语种: 中文

摘要

为筛选可用于长柱金丝桃遗传分析的最适ISSR-PCR反应体系,采用正交试验对影响ISSR-PCR反应的5个重要因素(Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、引物和模板DNA浓度)进行4水平正交优化,并对退火温度、循环次数进行筛选.结果表明,20μL ISSR-PCR最佳反应体系包括Taq DNA聚合酶1.0 U、dNTPs 0.2 mmol·L-1、Mg2+3.0 mmol·L-1、引物0.4μmol·L-1、DNA模板40 ng,对ISSR-PCR反应的影响程度由大到小为:Taq DNA聚合酶、引物、Mg2+、dNTPs、DNA模板;引物UBC822的最佳退火温度52.7℃,最佳循环次数41,利用优化的反应体系从61条引物中筛选出12条稳定性好、多态性高的引物,验证试验表明优化的反应体系具有较高的稳定性.