摘要:
目的 观察维生素B12对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响并分析其作用机制.方法 取清洁级SD大鼠36只,随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(DM组)、维生素B12治疗组(VitB12组),每组12只.DM组和VitB12组腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型.确定造模成功后,每天对VitB12组进行维生素B12(100 μg· kg-1)灌胃,持续8周,NC组和DM组用同体积生理盐水替代.停止灌胃2周后,于第10周末将所有大鼠处死,取颈静脉血,用于检测血清中丙二醛含量及超氧化物歧化酶的活性;取视网膜组织,用于制备视网膜石蜡切片,采用TUNEL法进行视网膜凋亡细胞原位标记,计算视网膜神经节细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);采用免疫组织化学法检测视网膜组织Caspase-3蛋白的表达.结果 三组大鼠血清丙二醛含量比较,差异有统计学意义(F=471.061,P=0.000),DM组、VitB12组丙二醛含量高于NC组(均为P<0.01),DM组高于VitB12组(P<0.01);三组间血清超氧化物歧化酶活性差异有统计学意义(F=356.923,P=0.000),DM组、VitB12组超氧化物歧化酶活性低于NC组(均为P<0.01),DM组低于VitB12组(P<0.01).三组大鼠视网膜神经节细胞层、内核层和外核层均可见凋亡细胞,DM组和VitB12组凋亡细胞数较NC组明显增多,VitB12组凋亡细胞数较DM组有不同程度减少.三组视网膜神经节细胞AI值比较差异有统计学意义(F=14.926,P=0.000),DM组、VitB12组AI值均高于NC组(均为P<0.01),DM组AI值高于VitB12组(P<0.05).显微镜观察发现三组大鼠视网膜神经节细胞层、内核层和外核层均可见Caspase-3蛋白表达,DM组和VitB12组Caspase-3蛋白表达均较NC组明显增多,VitB12组Caspase-3蛋白表达较DM组明显减少.三组视网膜Caspase-3光密度值比较差异有统计学意义(F=77.896,P=0.000),DM组、VitB12组视网膜Caspase-3光密度值均高于NC组(均为P<0.01),DM组高于VitB12组(P<0.01).结论 维生素B12对糖尿病视网膜神经细胞有一定的保护作用,其机制可能是维生素B12通过抗氧化作用抑制Caspase-3的表达从而抑制神经细胞的凋亡.