实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用

• 作者: 刘福英 孟钰榕 尤红煜 徐增年 梁晓亮 王俊霞 祝岩波 郑龙 魏世锦
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 多杀巴氏杆菌 支气管鲍特杆菌 支原体 肺炎克雷伯杆菌 多重PCR
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 80-84
• 页数: 5页
• 分类号: R-33
• 字数: 3560字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.08.016

摘要

目的 建立快速检测多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的多重PCR方法.方法 根据GenBank基因设计出特异性引物;经过多重PCR的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系.应用该PCR体系检测人工感染样本和实验动物的气管分泌物,并与传统方法做对比.结果 多重PCR扩增出多杀巴氏杆菌(356 bp)、支气管鲍特杆菌(237 bp)、支原体(266 bp)和肺炎克雷伯杆菌(142 bp)的目的条带.肺炎克雷伯杆菌敏感性为10 pg,多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体敏感性为1 pg,特异性检测未从其他病原菌中检测出目的条带.应用建立的多重PCR体系检测人工感染样本的不同组合,45只实验动物气管检测出15只多杀巴氏杆菌阳性,9只肺支原体阳性,但传统培养方法和血清学方法未检测出阳性标本.结论 本文建立的多重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的快速检测.