Δ40p53对p53促肿瘤细胞凋亡作用的影响

• 作者: 乔录新 侯庆生 单军奇 王贲士 赵红伟 郭洪亮 陈德喜
• 来源期刊: 中华肿瘤杂志
• 关键词: 肿瘤 p53 Δ40p53 凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 332-338
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2017.05.003

摘要

目的 探讨p53亚体Δ40p53对p53促肿瘤细胞凋亡作用的影响. 方法 体外培养HCT116-p53-/-结肠癌细胞系(内源性表达Δ40p53)、HCT116-p53+/+结肠癌细胞系(内源性表达野生型p53)和H1299肺癌细胞系(p53缺失),感染p53腺病毒使p53过表达,转染Δ40p53质粒使Δ40p53过表达.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Δ40p53和p53 mRNA,实时荧光定量PCR检测Δ40p53对p53转录水平的影响,Western blot检测相关蛋白的表达,免疫共沉淀检测Δ40p53与 p53相互作用关系,Calcein-AM/PI染色和流式细胞术检测细胞凋亡水平. 结果 Δ40p53在HCT116-p53-/-细胞中能够稳定转录并表达.实时荧光定量PCR 和Western blot检测显示,Δ40p53对p53的转录及表达水平无影响.免疫共沉淀检测显示,Δ40p53与 p53能相互结合.Calcein-AM/PI染色显示,H1299-Control组、HCT116-p53-/——Control组、H1299+p53组、HCT116-p53-/-+p53组、H1299+奥沙利铂(Oxa)组、HCT116-p53-/-+Oxa组、H1299+p53+Oxa组和HCT116-p53-/-+p53+Oxa组的细胞凋亡率分别为(2.50±0.47)%、(2.40±0.32)%、(5.20±0.58)%、(4.10±0.18)%、(22.40±1.73)%、(19.30±1.11)%、(29.90±1.15)%和(39.30±2.26)%. H1299+p53+Oxa组与HCT116-p53-/-+p53+Oxa组的细胞凋亡率差异有统计学意义(t=3.721,P=0.021).Calcein-AM/PI染色显示,H1299-Control组、H1299+Δ40p53组、H1299+p53组、H1299+p53+ Δ40p53组、H1299+Oxa组、H1299+Δ40p53+Oxa组、H1299+p53+Oxa组和H1299+p53+Δ40p53+Oxa组的细胞凋亡率分别为(2.60±0.35)%、(2.20±0.17)%、(4.80±0.49)%、(4.90±1.10)%、(20.30±1.10)%、(19.60±1.45)%、(27.90±1.39)%和(35.20±1.43)%,H1299+p53+Oxa组与H1299+p53+Δ40p53+Oxa组的细胞凋亡率差异有统计学意义(t=3.629,P=0.022).流式细胞术检测显示,H1299-Control组、H1299+Δ40p53组、H1299+p53组、H1299+p53+Δ40p53组、H1299+Oxa组、H1299+Δ40p53+Oxa组、H1299+p53+Oxa组和H1299+p53+Δ40p53+Oxa组的细胞凋亡率分别为(2.70±0.32)%、(2.20±0.24)%、(4.60±0.48)%、(3.90±0.67)%、(19.30±1.11)%、(17.70±0.66)%、(28.30±2.76%)和(37.50±1.51)%,H1299+p53+Oxa组与H1299+p53+Δ40p53+Oxa组的细胞凋亡率差异有统计学意义(t=2.930,P=0.042). 结论 Δ40p53与p53可相互结合,并能够增强p53的促肿瘤细胞凋亡作用.