稳定过表达生长分化因子5基因大鼠脂肪干细胞系的建立

• 作者: 曹露 李熙雷 林红 江立波 王会仁 董健
• 来源期刊: 中国临床医学
• 学科: 医学
• 关键词: 脂肪干细胞 慢病毒 生长分化因子5 流式细胞仪 转染
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 181-187
• 页数: 7页
• 分类号: R-33
• 字数: 5542字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12025/j.issn.1008-6358.2017.20170084

摘要

目的:探讨慢病毒介导的稳定过表达生长分化因子5(GDF-5)基因大鼠脂肪干细胞(ASCs)的构建条件和方法.方法:取大鼠腹股沟脂肪垫组织,采用Ⅰ型胶原酶消化贴壁法分离培养大鼠ASCs.倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法测定细胞生长曲线,流式细胞仪鉴定细胞表型.制备带GDF-5/GFP融合基因的慢病毒载体系统,探索不同感染复数(MOI=1、5、10、20、40、60、80、100)的转染效率,选择最佳MOI,采用流式细胞仪检测转染效率.对转染细胞行流式细胞筛选,测定筛选后转染细胞的阳性率.筛选出的细胞行细胞爬片,DAPI染色,形态学上进一步验证细胞阳性率;并采用CCK-8法检测转染后细胞活力.结果:成功培养大鼠ASCs,流式细胞免疫表型鉴定:间充质干细胞表面抗原(CD90、CD29、CD44、CD105)表达阳性,造血细胞表面抗原(CD45、CD34)和骨髓干细胞表面抗原(CD106)表达阴性.成功构建GDF-5过表达慢病毒载体系统,慢病毒转染大鼠ASCs最佳MOI为40,转染率为65%.采用GFP荧光流式细胞筛选技术筛选后阳性率可提高至96%.CCK-8法显示,转染后细胞活力、生长曲线与未转染细胞无明显差异.结论:胶原酶消化法可成功培养大鼠ASCs,流式细胞筛选技术可显著提高转染细胞阳性率,且对细胞系活力无显著影响,转染细胞传代5代仍可稳定过表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王会仁	复旦大学附属中山医院骨科	21	197	9.0	13.0
2	董健	复旦大学附属中山医院骨科	158	832	15.0	22.0
3	李熙雷	复旦大学附属中山医院骨科	41	301	10.0	14.0
4	林红	复旦大学附属中山医院骨科	35	177	7.0	12.0
5	江立波	复旦大学附属中山医院骨科	3	2	1.0	1.0
6	曹露	复旦大学附属中山医院骨科	2	7	2.0	2.0