优化和验证人精浆miRNAs提纯方法

• 作者: 刘美玲 张瑶楠 张蔚 闫丽 陆彩玲 陈娟 高丽娜
• 来源期刊: 生殖医学杂志
• 关键词: 精浆 miRNAs 实时定量PCR miR-106b
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 568-572
• 页数: 5页
• 字数: 3438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3845.2017.06.012

摘要

目的 优化精浆miRNAs提纯方法,为后续实验奠定基础. 方法 收集国家卫生计生委科研所生殖健康服务中心正常精液样本5例,非梗阻性无精子症(NOA)患者(经北京大学第三医院检查确诊)精液样本22例.根据不同RNA提取方法分为4组:Trizol LS组、蛋白酶K+Trizol LS组、miRNeasy Micro kit组及Trizol LS+miRNeasy Micro kit联合使用组(改良组).比较4组提纯NOA患者精浆RNA的OD260/280,使用Agilent2100生物分析仪检测改良法提纯精浆miRNAs的纯度和质量,采用实时定量PCR方法比较4组精浆miR-106b的溶解曲线,并比较精液参数正常组(n=5)和NOA患者组(n=10)精液样本中的miR-106b的表达量. 结果 改良组提纯精浆RNA的OD260/280为(1.90±0.03)显著高于其他3组(P<0.05);改良组提纯精浆miRNAs的完整数合格,色谱图位置特异性明显,峰值清晰;4组miR-106b的溶解曲线中,改良组曲线符合标准;NOA患者精浆中miR-106b的表达丰度显著低于参数正常组(P<0.01). 结论 Trizol LS与miRNeasy Micro kit联合使用提纯的精浆miRNAs质量好,能满足后续实时定量PCR、深度测序等实验要求.小样本分析发现NOA患者精浆miR-106b含量显著低于精液参数正常组,有待大样本验证其是否能作为临床诊断NOA的分子指标.