柑橘衰退病晚期抑制差减cDNA文库的构建及初步分析

• 作者: 曾正容 闫树堂
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 杂柑 柑橘衰退病 抑制差减杂交 应答基因
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1871-1880
• 页数: 10页
• 分类号: S666
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2017-0080

摘要

为了研究柑橘衰退病晚期应答的分子机理,利用经典的抑制差减杂交技术,以感染柑橘衰退病3年后的‘不知火’杂柑实生苗叶片组织的cDNA为测试方,以脱毒的‘不知火’实生苗叶片组织的cDNA为驱动方进行差减杂交,构建了柑橘衰退病诱导的正向抑制差减cDNA文库.随机挑取此文库中210个阳性克隆进行测序,获得了192条有效序列.将这些EST序列聚类拼接后,共获得77条非重复序列.对这些EST进行GO和KEGG分析,发现这些EST的功能主要与胁迫及防御、代谢、转录、转运、蛋白命运等途径相关.用实时定量RT-PCR验证了其中4个基因:几丁质酶基因、茉莉酸响应基因的转录抑制因子1基因(JAZI)、钙调素结合蛋白基因、咖啡酸一氧甲基转移酶基因,结果表明在衰退病的诱导下,‘不知火’杂柑叶片中这4个基因的表达量均有明显提高,说明这些基因可能参与了‘不知火’杂柑叶片晚期衰退病应答.JAZ1基因的上调表达表明可能宿主衰退病晚期应答过程中的诱导系统抗性受到了抑制.