刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备与特性分析

• 作者: 刘晓东 林能锋 柯巧珍 池洪树 郑在予 龚晖
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 刺激隐核虫 幼虫 膜蛋白 单克隆抗体 白点病
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 469-475
• 页数: 7页
• 分类号: S941.5
• 字数: 8613字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.05.001

摘要

为获得刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体并初步分析单抗特性,提取刺激隐核虫幼虫膜蛋白,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/O细胞融合,以间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞.通过ELISA方法检测单克隆抗体的亚类及效价;通过SDS-PAGE和western blot分析单抗特异性结合的蛋白,并以串联质谱方法对所识别条带进行鉴定;采用免疫荧光法分析单抗的抗原结合位点和特异性.结果得到3株能稳定分泌刺激隐核虫幼虫膜蛋白抗体的细胞株(5D11AG5、5H9BG3、6E11CE7).这3株细胞株产生的抗体亚型均为IgM,ELISA效价分别为1∶3200、1∶25600、1∶51200.单抗5D11AG5和单抗5H9BG3株能够识别~35 kDa的刺激隐核虫幼虫膜蛋白线性抗原表位,单抗5D11AG5所识别的蛋白与数据库中刺激隐核虫表面抗原蛋白、嗜热四膜虫微管蛋白(tubulin)的肽段具有较高覆盖率.免疫荧光结果显示单抗5D11AG5和单抗5H9DG3识别部位主要在虫体表面近胞口的前端,而单抗6E11CE7识别虫体表面外膜.刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备,为刺激隐核虫功能性蛋白的筛选、纯化和功能分析提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柯巧珍		2	0	0.0	0.0