H2O2对人皮肤成纤维细胞衰老标记蛋白30及自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达的影响

• 作者: 姜红浩 张翀 彭圆 王平 田庆均 田黎明 程杨 胡荣毅 陈红英
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 皮肤衰老 过氧化氢 成纤维细胞 自噬 衰老标记蛋白30 LC3 Ⅱ
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 899-903
• 页数: 5页
• 字数: 3340字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2017.12.009

摘要

目的 探讨H2O2对人皮肤成纤维细胞(NHSF)衰老标记蛋白30(SMP30)以及细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ型(LC3 Ⅱ)的影响.方法 用150 μmol/L H2O2处理2～4代NHSF2h,构建细胞衰老模型作为H2O2组,而未处理的NHSF作为对照组.细胞衰老β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测衰老细胞比例,间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3的表达,反转录PCR(RT-PCR)检测SMP30 mRNA的表达,Western印迹法检测SMP30和LC3蛋白的表达.结果 H2O2组NHSF的SA-β-gal染色阳性率(41.70％±2.95％)显著高于对照组(3.03％±0.25％,t=22.59,P＜0.05).间接免疫荧光结果显示,H2O2组NHSF LC3阳性率(12.60％±1.57％)明显低于对照组(23.67％±3.04％,t=5.61,P＜0.05).Western印迹显示,H2O2组LC3 Ⅰ/GAPDH比值(0.40±0.02)与对照组(0.41±0.04)比较差异无统计学意义(P＞0.05),而H2O2组LC3 Ⅱ/GAPDH比值(0.20±0.02)明显低于对照组(0.80±0.03,t=29.69,P＜0.05),且H2O2组LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值(0.51±0.03)亦明显低于对照组(1.98±0.23,t=10.967,P＜0.05).H2O2组SMP30mRNA和蛋白水平(与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.16±0.01和0.27±0.02)明显低于对照组(分别为0.35±0.01和0.63±0.02),均P＜0.05.结论 H2O2可降低NHSF中SMP30及LC3 Ⅱ的表达水平,加速NHSF衰老.