纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析

• 作者: 吴静 姚晓敏 季顺利 崔青 张建华 钱炳俊 鲁飞凤
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 纳豆激酶 aprN基因 枯草芽孢杆菌 基因工程菌 酶活力
• 年，卷（期）: 2017,（14）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: Q786
• 字数: 5925字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201714001

摘要

纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)的apr基因编码,在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活性.利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增B.subtilis natto的aprN基因,并依据B.subtilis的密码子偏好性优化了起始30个氨基酸的密码子,构建了重组表达质粒pHT0 1-aprN.经限制性酶酶切、PCR扩增和测序验证了其编码的正确性.通过电击法将含有强启动子的pHT01-aprN导入B.subtilis,利用氯霉素抗性筛选获得B.s 168/pHT01-apr工程菌.经IPTG诱导表达,摇瓶发酵培养最高酶活力为(289.00±3.42) U/mL,是野生菌的3.9倍,酶活力表达稳定性良好.