7种猪呼吸道综合征疾病病原多重PCR方法的建立

• 作者: 任梅渗 冷依伊 姚学萍 张鹏飞 杨泽晓 王印 蒙正群
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 呼吸道疾病 多重PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 页码范围: 47-53
• 页数: 7页
• 分类号: S856.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11841/j.issn.1007-4333.2017.07.06

摘要

为建立能够同时检测7种导致猪呼吸道综合症疾病病原的多重PCR方法,参考伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、副猪嗜血杆菌(HPS)、多杀性巴氏杆菌(PM)以及胸膜肺炎放线杆菌(APP)标准毒株序列,选择各病毒和细菌的保守序列分别设计7对特异性引物进行多重PCR.各项优化试验结果表明,当反应的退火温度为51℃,各条引物浓度均为0.8 μmol/L时扩增的目的条带效果最佳;用敏感性试验检测该反应中各病毒的最小检出量分别为:1.01×102 (PRV)、1.48×103 (CSFV)、1.07×104 (ASFV)、9.73×103 (PRRSV)、1.82×103 (HPS)、1.65×103 (PM)和3.64×103 (APP) copies/μL.在最优化的反应条件下进行特异性试验,结果未出现交叉反应,能检出对应病原的多种血清型,阴性对照均无非特异性扩增.该方法快捷、灵敏、特异性高,可为临床诊断与流行病学研究提供科学依据.