乳酸菌红色荧光蛋白融合表达系统的构建

• 作者: 北婷婷 寇田田 李晨 田洪涛 罗云波 许沙
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 乳酸菌 融合表达载体 红色荧光蛋白 淀粉酶
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 分析与检测
• 页码范围: 235-240
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2017.03.029

摘要

目的:构建以红色荧光蛋白基因(dsred2)为标记的乳酸菌融合表达系统pMG36e-dsred2,并以oα-淀粉酶(amy)为报告基因实现融合基因dsred2-amy在乳酸菌内的融合表达.方法:通过PCR的方法以质粒pPIC9k-dsred2为模板扩增得到dsred2基因的全部编码区序列,并将其连接到克隆型载体pMG36e上,得到重组载体pMG36e-dsred2.以地衣芽孢杆菌基因组为模板,扩增只带有起始密码子而不带有终止密码子的α-淀粉酶基因(amy),将其连接到克隆型载体pMG36e-dsred2上,获得融合表达载体pMG36e-dsred2-amy.最后将该载体电转化干酪乳杆菌,利用荧光显微镜观察红色荧光基因表达情况,用淀粉平板检测淀粉酶活性.结果:通过PCR的方法分别扩增到大小为694bp的红色荧光蛋白基因(dsred2)和大小为1 554 bp的淀粉酶基因(amy).将获得的两个基因片段进行测序,结果与NCBI数据库进行对比,dsred2基因的匹配率为100％,amy基因同源性为99.54％.成功构建了乳酸菌表达系统pMG36e-dsred2及融合表达载体pMG36e-dsred2-amy.在荧光显微镜下观察菌体有荧光且淀粉平板上有明显的透明圈.结论:融合表达载体的构建成功为乳酸菌在生物体内的定植、分布、存活等研究提供了方法,也为研究外源蛋白在乳酸菌内的表达的分泌(细胞内、细胞壁、细胞外表达)、活性检测等奠定了基础.