番茄环纹斑点病毒Gn蛋白的原核表达及多抗血清制备

• 作者: 尚卫娜 张洁 董家红 郑宽瑜 郑雪
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 番茄环纹斑点病毒 Gn蛋白 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 179-183
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0242

摘要

通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备.用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白.用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清.间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16384.利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带.结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验.