解淀粉芽胞杆菌α-淀粉酶高活力突变体的创建与性质研究

• 作者: 刘晓光 叶秀云 吴海洋 林娟 牛丹丹 靳晓
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 中温α-淀粉酶 突变体 催化效率
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 24-29
• 页数: 6页
• 字数: 4421字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.014866

摘要

为进一步提高解淀粉芽胞杆菌α-淀粉酶(Bacillus amyloliquefaciens α-amylase,BAA)发酵生产与应用性能,对BAA编码基因实施了体外随机突变,建立了含有2×104个转化子的BAA突变库.BAA编码基因的突变频率为56％,基因突变效率为2.8/kb DNA,错义突变26.8％;以平板筛选法和摇瓶发酵法对BAA突变库进行筛选,得到6个酶活力显著提高的突变体,其中突变体BAA28的酶活力提高最多,提高达37％;进一步分析突变体BAA28序列,发现其4个氨基酸残基发生突变,分别是:T341P、P348L、T356P和P362L,其中T341P和T356P位于无规卷曲结构中,P348L位于d-螺旋结构中,P362L位于β-折叠结构中.进一步制备与纯化BAA28,并比较分析其酶学特征,与野生型BAA相比,BAA28的离子依赖性、热稳定性发生了显著变化;BAA28的比酶活提高了约31％,κcat/Km值提高了92％.突变体BAA28较BAA在催化与应用属性上有了显著提升,可应用于后续中温α-淀粉酶高产新菌种的构建并可显著改善其工业应用性能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林娟	福州大学生物科学与工程学院福建省海洋酶工程重点实验室	110	610	12.0	18.0
2	叶秀云	福州大学生物科学与工程学院福建省海洋酶工程重点实验室	92	537	11.0	17.0
3	刘晓光	天津科技大学生物工程学院	15	16	3.0	3.0
4	牛丹丹	福州大学生物科学与工程学院福建省海洋酶工程重点实验室	6	12	2.0	3.0
5	吴海洋	天津科技大学生物工程学院	2	4	2.0	2.0
6	靳晓	福州大学生物科学与工程学院福建省海洋酶工程重点实验室	2	2	1.0	1.0