猪小肠黏膜下层细胞外基质促进肝细胞活力和功能基因表达的研究

• 作者: 丁微 张杰 桑江玮 王素雅 罗静聪
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 肝脏组织工程 肝细胞 猪小肠黏膜下层 细胞外基质 凝胶
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 607-613
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-1892.201702072

摘要

目的 探讨猪小肠黏膜下层细胞外基质(porcine small intestinal submucosa extracellular matrix,PSISM)对肝细胞活力及相关基因表达的调控,为PSISM应用于肝脏组织工程提供实验依据.方法 实验分为两部分.①取PSISM添加至含10％FBS的H-DMEM培养基中,制备终浓度为50、100、200 μtg/mL的PSISM培养基;将大鼠肝细胞系BRL细胞分别用以上浓度PSISM培养基培养(A1、B1、C1组),以单纯H-DMEM培养基培养作为对照(D1组).②取PSISM溶解于含0.1 mol/L NaOH的PBS无菌溶液中,调整溶液浓度为1％、2％、3％,制备PSISM凝胶;将BRL细胞分别接种于以上浓度PSISM凝胶进行培养(A2、B2、C2组),鼠尾Ⅰ型胶原凝胶作为对照(D2组).培养后第1、3、5天,采用Live/Dead荧光染色观察细胞形态及存活情况,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测肝细胞特异基因白蛋白(albumin,ALB)、细胞角蛋白18 (cytokeratin 18,CK18)和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的表达.结果 Live/Dead荧光染色显示各组细胞均存活良好.细胞活力检测显示,PSISM培养基培养后,第5天C1组吸光度(A)值显著高于D1组(P＜0.05),其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);PSISM凝胶培养后,A2、B2、C2组第3天和第5天A值显著高于D2组(P＜0.05),A2组第5天A值显著高于B2、C2组(P＜0.05),其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).实时荧光定量PCR检测显示,A1、B1、C1组ALB、CK18基因相对表达量较D1组显著增高(P＜0.05)、AFP基因相对表达量降低(P＜0.05),C1组CK18基因相对表达量显著低于A1、B1组(P＜0.05);A2、B2、C2组ALB、CK18基因相对表达量较D2组显著增高(P＜0.05)、AFP基因相对表达量降低(P＜0.05),A2组CK18基因相对表达量显著高于B2组(P＜0.05)、AFP基因相对表达量显著低于C2组(P＜0.05).其余各组间各基因相对量表达比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PSISM无毒性,对肝细胞有良好相容性,能促进肝细胞活力和功能基因表达,有望作为细胞培养添加物或细胞移植载体用于肝脏组织工程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张杰		323	2082	23.0	34.0
2	罗静聪		23	113	5.0	10.0
3	桑江玮		1	0	0.0	0.0
4	王素雅		1	0	0.0	0.0
5	丁微		1	0	0.0	0.0