基于荧光检测技术的多花黑麦草EST-SSR指纹图谱的构建

• 作者: 何光武 刘欢 张新全 张瑞珍 潘玲 金梦雅 马啸
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 多花黑麦草 EST-SSR分子标记 指纹图谱 荧光检测 毛细管电泳
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 437-450
• 页数: 14页
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建基于EST-SSR荧光标记的多花黑麦草(Lolium multiflorum Lam.)DNA指纹鉴定体系,为多花黑麦草品种鉴定提供高通量技术手段,为不同品种的合理应用提供参考依据,有效保护农民利益和育种权益.[方法]利用表型性状差异大的3个品种(特高Tetragold、长江2号ChangjiangNo.2和阿伯德Aubade),通过聚丙烯酰胺凝胶电泳从200对EST-SSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性好、扩增稳定的30对引物.在筛选出的每对引物5′端添加荧光标记FAM后,采用毛细管法通过DNA分析仪检测200个单株不同等位变异的扩增片段,从30对EST-SSR引物中筛选出25对扩增稳定的荧光引物,建立基于高通量荧光SSR标记的多花黑麦草品种鉴定体系.[结果]通过25对EST-SSR引物构建的DNA指纹图谱来进行10个多花黑麦草材料的品种鉴定.25对EST-SSR引物共检测到127个等位基因,等位变异扩增片段长度范围为51—249 bp,每对引物可检测到有效等位基因数为2—11个,特异等位基因最多可检测到11个(N101),平均每对引物4.00个;多态性位点的比率范围为33.33%—100.00%.平均PIC值为0.702,Shannon指数最大为3.322(N101),平均为1.929,基因多样性指数变幅为0.159—0.500,平均0.318,可鉴别的材料数为0—10个;其中14对特征引物在10个品种(系)上可检测出25个特异等位基因.综合来看,引物N101在200对引物中鉴别效率最高,可直接将10个多花黑麦草品种(系)区分开,在长江2号、赣选1号和川农2号上同时检测出特异等位基因.但由于多花黑麦草在品种间与品种内变异均较高,因此为鉴定更多材料,从25对引物中选择了6对扩增和检测效果较好的引物(N54、N101、N146、N151、N154、N156),6对引物可检测到的稳定等位基因数均不小于19个,在达伯瑞和邦德上最多可检测到22个等位基因.通过6对高效引物构建了10个多花黑麦草品种(系)的DNA指纹图谱,包括标准模式图、图谱代码和图谱QR编码.首次利用EST-SSR荧光标记毛细管电泳检测,为10个多花黑麦草材料分别构建了唯一的指纹代码和QR编码.[结论]利用6对高效引物构建了多花黑麦草SSR高通量鉴定体系,其中荧光引物N101多态性最高,可直接鉴别10个多花黑麦草品种(系).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张新全	四川农业大学草业科学系	321	4797	35.0	49.0
2	刘欢	四川农业大学草业科学系	7	58	6.0	7.0
3	马啸	四川农业大学草业科学系	103	1284	20.0	30.0
4	张瑞珍		60	606	12.0	23.0
5	何光武		53	316	9.0	16.0
6	金梦雅	四川农业大学草业科学系	3	16	2.0	3.0
7	潘玲	四川农业大学草业科学系	2	12	1.0	2.0