猪传染性胃肠炎病毒M基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

• 作者: 代先进 叶翠芳 宋寒 宋振辉 王丽 胡洋 董伟
• 来源期刊: 西南大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 M蛋白 酵母双杂交 诱饵载体
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 农业科学
• 页码范围: 13-19
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13718/j.cnki.xdzk.2017.09.003

摘要

筛选与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M蛋白相互作用的宿主蛋白,构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7 M.首先利用PCR技术从重组表达载体pFastBacTM-M中扩增得到M基因,定向克隆至载体pMD19-T simple,验证正确后克隆至酵母双杂交系统诱饵表达载体pGBKT7,经双酶切、PCR反应及测序验证其正确插入后,利用PEG/LiAc法将构建好的重组诱饵载体pGBKT7-M及空载体pGBKT7分别转化到酵母Y2HGold感受态细胞中,检测其对酵母菌株是否有毒性作用和自激活活性及诱饵蛋白在酵母细胞内的表达情况.结果表明:扩增碍到M基因738 bp,成功构建了诱饵表达载体pGBKT7-M,此诱饵载体对酵母细胞无细胞毒性和自激活活性.Western blot检测到5×10 4左右的蛋白条带,显示诱饵蛋白在酵母细胞内稳定表达.