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抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证
抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证
作者:
张银川
张雅婷
杨兰兰
桂芳
潘勇兵
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
单克隆抗体
肿瘤坏死因子α(TNF-α)
抗人TNF-α单抗
液质联用
肽图分析
互补决定区(CDR)
鉴别试验
方法学验证
摘要:
目的:建立液相色谱-质谱联用肽图分析方法,用于抗人肿瘤坏死因子α(Tumor necrosisfactor alpha,TNF-α)单抗的专属性鉴别.方法:TNF-α单抗样品经盐酸胍变性、还原,释放出的游离半胱氨酸残基进行烷化,还原剂中和过量的烷化剂.超滤置换酶切缓冲液后进行胰酶酶切并终止.色谱条件:采用WatersUPLC BEH 300 C18(2.1 mm×150 mm,1.7μm)色谱柱,以o.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱(5~120 min,2%B→45%B),流速为0.2 mL· min-1,检测波长为214啪;质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子模式,数据采集范围m以为100~1 990.结果:TNF-α单抗重链及轻链的6个互补决定区(CDR)对应肽段由质谱鉴定出,HC CDP2及HC CDP3在色谱峰图中共流出;利妥昔单抗用于评估本方法的专属性,结果显示本方法专属性强,且不受基质的干扰;选定m/z1 344(M+5)的色谱峰为参考峰,根据CDR的相对保留时间考察该方法的变异程度,5次重复测定CDR相对保留时间的RSD在0.57%~1.19%之间;中间精密度考察测定的相对保留时间的RSD在0.00%~1.08%之间;胰酶酶切比例在20∶ 1~30∶1,酶切时间在17~23 h范围内变化时,相对保留时间的均较小,符合方法耐用性的要求;样品消化后在8℃储存24h以及-20储存5d的稳定性良好.结论:基于CDR相关肽段鉴别的液质联用肽图分析方法可定性鉴定出TNF-α单抗,方法学验证结果显示该方法适用于抗人TNF-α单抗的专属性鉴别,可用于其质量控制及批检验放行.
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篇名
抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证
来源期刊
药物分析杂志
学科
医学
关键词
单克隆抗体
肿瘤坏死因子α(TNF-α)
抗人TNF-α单抗
液质联用
肽图分析
互补决定区(CDR)
鉴别试验
方法学验证
年,卷(期)
2017,(1)
所属期刊栏目
生物检定
研究方向
页码范围
51-63
页数
13页
分类号
R917
字数
语种
中文
DOI
10.16155/j.0254-1793.2017.01.07
五维指标
作者信息
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潘勇兵
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期刊影响力
药物分析杂志
主办单位:
中国药学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0254-1793
CN:
11-2224/R
开本:
大16开
出版地:
北京天坛西里2号
邮发代号:
2-237
创刊时间:
1981
语种:
chi
出版文献量(篇)
8553
总下载数(次)
29
总被引数(次)
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