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鸡痘病毒NX10株TK基因在病毒复制中不是完全非必需的
鸡痘病毒NX10株TK基因在病毒复制中不是完全非必需的
作者:
刘胜旺
张雪梅
王曼曼
赵妍
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
鸡痘病毒
TK基因
重组病毒
复制非必需基因
摘要:
[目的]禽痘病毒(FPV)是痘病毒科禽痘病毒属的成员.FPV因其基因组庞大,含有大量复制非必需区,目前作为活病毒载体在禽类和哺乳动物中广泛使用.重组位点的选择是禽痘病毒载体构建的先决条件,外源基因的插入不影响病毒复制是筛选插入位点的前提.因此,鉴定可供外源基因插入的复制非必需位点将为重组病毒的构建提供更多选择.本研究拟鉴定FPVNX10株胸苷激酶(TK)基因在病毒复制中的必要性.[方法]以TK基因作为靶基因,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记构建转移载体,FPV NX10株为亲本病毒,通过同源重组筛选重组病毒rFPV-△TK-EGFP.通过在CEF细胞培养物中添加5-溴脱氧尿苷(BUdR)验证TK基因在FPV复制中的作用.[结果]构建了转移栽体pUC 19-TK AB-EGFP.在转染后重组病毒克隆纯化过程中,蚀斑克隆中绿色荧光病变所占的比例逐渐增加,但在荧光蚀斑的边缘能观察到不带荧光病变的存在.对第9-15轮随机选取的蚀斑克隆的Western blot分析表明,重组病毒中插入的EGFP基因均能够正确表达,但PCR结果显示在重组病毒中始终存在野生型病毒.在细胞培养液中添加BUdR后,重组病毒不能继续生长.[结论]FPV NX10毒株TK基因在该病毒的复制中不是完全非必需的.
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文献信息
篇名
鸡痘病毒NX10株TK基因在病毒复制中不是完全非必需的
来源期刊
微生物学通报
学科
关键词
鸡痘病毒
TK基因
重组病毒
复制非必需基因
年,卷(期)
2017,(12)
所属期刊栏目
分子功能研究
研究方向
页码范围
2914-2922
页数
9页
分类号
字数
语种
中文
DOI
10.13344/j.microbiol.china.170505
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研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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期刊影响力
微生物学通报
主办单位:
中国科学院微生物研究所
中国微生物学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0253-2654
CN:
11-1996/Q
开本:
16开
出版地:
北京朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所B401
邮发代号:
2-817
创刊时间:
1974
语种:
chi
出版文献量(篇)
6200
总下载数(次)
30
总被引数(次)
68203
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