酮还原酶中立体选择性还原位点的突变及其产物分析

• 作者: 刘曜宁 吕早生 宋采薇 左振宇 李凌凌 杨忠华
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 聚酮合成酶 酮还原酶 2-甲基环己酮 突变 立体选择性
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 214-222
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-1195

摘要

为验证糖多孢红霉菌聚酮合成酶中酮还原酶(EryKR)的LDD模式序列是否为控制2-甲基环己酮立体选择性还原的位点,构建了分别异源表达聚酮合成酶模块1的酮还原酶(EryKR1)、模块2的酮还原酶(EryKR2)、LDD残基替换为PQQ(LDD→PQQ)的EryKR1及PQQ替换为LDD(PQQ→LDD)的EryKR2的重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(pET28a-eryKR1)、E.coli BL21(pET28a-eryKR2)、E.coli BL21(pET28a-TeryKR1)和E.coli BL21(pET28a-TeryKR2).SDS-PAGE实验证明,经IPTG诱导后4个重组菌中都表达出相应的酮还原酶.粗酶液的比酶活分别为1.49 U/mg、0.37 U/mg、0.94 U/mg和0.31 U/mg.利用气相色谱分别检测4个重组菌还原2-甲基环己酮体系中产物的立体结构,结果显示与野生型EryKR1的还原产物以顺式-2-甲基环己醇为主不同,LDD→PQQ的突变型EryKR1催化2-甲基环己酮的还原产物主要为反式-2-甲基环己醇,而PQQ→LDD的突变型EryKR2的主要还原产物也由野生型EryKR2的反式-2-甲基环己醇转变成顺式-2-甲基环己醇,证实了LDD模式序列确实为酶中控制2-甲基环己酮立体选择性还原的位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕早生	武汉科技大学化学与化工学院	113	452	10.0	14.0
2	杨忠华	武汉科技大学化学与化工学院	33	295	10.0	16.0
3	李凌凌	武汉科技大学化学与化工学院	21	74	6.0	7.0
4	左振宇	武汉科技大学化学与化工学院	13	25	3.0	4.0
5	刘曜宁	武汉科技大学化学与化工学院	2	0	0.0	0.0
6	宋采薇	武汉科技大学化学与化工学院	2	0	0.0	0.0