大肠杆菌小RNA SgrS单分子原位成像方法的建立

• 作者: 杨瑞馥 王净 韩延平
• 来源期刊: 科学通报
• 关键词: 大肠杆菌 sRNA SgrS 单分子荧光原位杂交 超分辨率显微镜 Alexa-555 WGA
• 年，卷（期）: 2017,（24）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 2804-2813
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.1360/N972017-00351

摘要

为了确定单分子SgrS的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株AsgrS和过表达株AsgrS-pBAD-SgrS,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌SgrS的单分子荧光原位杂交(smFISH)方法.优化条件为:杂交后细菌洗涤次数为5次,涂片时加入SlowFade Diamond Antifade Mountant防淬灭,细菌在杂交液和探针的混合液中经40c℃杂交3h,杂交前探针置98℃变性10 min,Alexa-555 WGA染料用来标记细胞壁.smFISH操作步骤确定为:固定-洗涤-透化-预杂交-杂交-洗涤-染细胞壁-洗涤-涂片,最后使用N-SIM超分辨率显微镜观察成像.定位结果显示,SgrS呈绿色点状荧光弥散分布于细菌胞浆中,Alexa-555WGA染料标记细胞壁呈红色,从而完整地定位了大肠杆菌的形态.smFISH方法和超分辨显微技术的结合可为深入研究细菌模式基因sRNA的定位以及sRNA介导的调控机制提供线索和技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨瑞馥	军事医学科学院微生物流行病研究所	180	1706	21.0	33.0
2	韩延平	军事医学科学院微生物流行病研究所	18	83	3.0	9.0
3	王净	军事医学科学院微生物流行病研究所	4	2	1.0	1.0